促睡眠

一、实验目的

睡眠是人类与大多数动物不可或缺的基本生理过程，远非简单的静止状态。现代研究将睡眠视为一个高度活跃、复杂且周期性的动态过程，对于维持机体健康与认知功能具有至关重要的作用。其生理意义主要体现在两个方面：一是恢复与修复，睡眠期间大脑清除代谢废物、巩固记忆、促进学习，同时身体修复组织、合成蛋白质、调节激素（如生长激素）分泌；二是调节与稳定，睡眠对免疫系统、内分泌代谢及情绪稳定都起着核心的调节作用。长期睡眠债与心脑血管疾病、糖尿病、肥胖、免疫力下降及精神心理疾病（如焦虑、抑郁）的风险显著升高密切相关。秀丽隐杆线虫具有生命周期短、遗传资源丰富、关键信号通路与人类高度同源、实验操作与维护简单等优点，并且线虫其神经系统结构简单、连接图谱清晰，便于在细胞层面精准解析睡眠调控回路。该测试项目评价样品对线虫睡眠时长的影响，评价其改善睡眠的功效。

二、建模原理

不需要建模处理。

三、实验方案

3.1 最大检测浓度摸索

①实验动物：同步化的野生型N2线虫虫卵。

②实验分组：对照组、每个样品3个剂量组。

③实验方法：将同步化的野生型N2线虫虫卵转移到有或无样品的NGM平板上，在20 ℃培养箱中培养65 h后，在体式显微镜下观察并记录线虫是否存在大量死亡的现象。每组线虫数量不少于30条。

3.2 样品对睡眠时长的影响

①实验动物：同步化的野生型N2线虫虫卵。

②实验分组：对照组、每个样品1个剂量组。

③实验方法：移取同步化的野生型N2线虫虫卵到有或无样品的NGM平板上，在20 ℃培养箱中培养65 h至L4期，取大小相同的线虫放于含样品且用于拍摄录像的NGM中，静止30 min。以10 s/帧的间隔持续记录图像6 h。线虫移动速率小于0.5 μm/s便判定为睡眠状态，总睡眠时长是睡眠起点到睡眠终点的持续时间，睡眠判定起点为连续三帧为睡眠状态即为进入睡眠状态，当静止状态结束时则被判定为睡眠终点。

④检测指标：睡眠时长。