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帕金森
建模原理:常用鱼藤酮来诱导蜜蜂帕金森模型。鱼藤酮是一种天然杀虫剂,可抑制蜜蜂 体内细胞的线粒体呼吸链复合物 I ,导致细胞内能量代谢紊乱,产生大量活性氧(ROS), 引起氧化应激反应。这会损伤神经细胞,尤其是多巴胺能神经元,使多巴胺分泌减少,进而 引发蜜蜂出现类似帕金森病的运动障碍等症状。
评价指标:
1)行为学指标
运动能力:观察蜜蜂的飞行速度、距离、姿态以及爬行能力等。如使用飞行磨装置,记 录蜜蜂飞行的时间、距离和速度。帕金森模型蜜蜂飞行平均速度会显著低于正常对照组,可 能出现飞行不稳、摇晃、难以起飞或飞行距离明显缩短等情况,爬行时也可能行动迟缓、肢 体协调性差。
学习记忆能力:通过嗅觉学习记忆实验等方法进行评估。例如,利用蜜蜂对特定气味的 学习和记忆能力,观察其在经过训练后能否准确识别并飞向有气味提示的食物源。帕金森模 型蜜蜂可能在学习记忆方面存在缺陷,难以准确完成任务。
2)神经生物学指标
多巴胺能神经元数量和形态:解剖蜜蜂大脑,取部分大脑固定于 4w/v% 多聚甲醛溶液 中,制备石蜡切片,进行免疫荧光染色,观察多巴胺能神经元的数量和形态变化。帕金森模 型蜜蜂大脑内多巴胺能神经元数量会减少,多个主要神经元簇可能被破坏。
相关基因表达:另一部分大脑在去除腺体及黑色素后,用液氮冷冻处理,保存于 - 80℃ , 用于实时荧光定量 PCR(qPCR)分析等,检测多巴胺能神经元标记基因的表达量。模型蜜 蜂的这些基因表达量通常会降低。
3)组织病理学指标
肠道组织病理:解剖蜜蜂获取完整肠道,固定于 4% 多聚甲醛溶液中,进行石蜡包埋、 切片、HE 染色等操作,在显微镜下观察肠道组织的形态结构。帕金森模型蜜蜂可能出现肠 道缩短、肠道黏膜损伤、炎症细胞浸润等病理改变。
大脑组织病理:除了观察多巴胺能神经元的变化外,还可对大脑其他区域进行组织学分 析,观察是否存在神经细胞变性、坏死,神经纤维损伤等病理现象。
