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对化学性肝损伤有辅助保护作用
参考《保健食品功能检验与评价方法（2023 年版）》
一、实验目的
验证受试样品对哺乳动物化学性肝损伤（四氯化碳/酒精诱导）的辅助保护作用，通过生化指标和病理组织学检测评估其功效。
二、实验动物选择
动物类型 | 体重范围 | 性别 | 每组样本量 |
SD/Wistar大鼠 | 180-220g | 单一性别 | 8-12只 |
ICR小鼠 | 18-22g | 单一性别 | 10-15只 |
三、实验分组与剂量设计
组别 | 动物类型 | 剂量设置 | 样本量 | 处理周期 |
低剂量组 | 大鼠/小鼠 | 人体推荐量5倍（大鼠）/10倍（小鼠） | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 30-45天 |
中剂量组 | 大鼠/小鼠 | 人体推荐量10倍（大鼠）/20倍（小鼠） | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 30-45天 |
高剂量组 | 大鼠/小鼠 | 人体推荐量15倍（不超过30 倍） | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 30-45天 |
模型对照组 | 大鼠/小鼠 | 溶剂（生理盐水或植物油） | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 30-45天 |
空白对照组 | 大鼠/小鼠 | 正常饲料+溶剂 | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 30-45天 |
阳性对照组 | 大鼠/小鼠 | 已知保肝药物（如联苯双酯） | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 30-45天 |
四、核心实验项目与方法
模型类型 | 动物类型/剂量 | 操作步骤 | 检测指标 | 判定标准 |
四氯化碳肝损伤模型 | -小鼠：1% CCl₄灌胃，5ml/kg BW（80mg/kg BW） | 1. 受试组灌胃样品30天，末次给药后禁食16小时 | -血清ALT、AST | - ALT/AST显著低于模型组（P≤0.05） |
酒精性肝损伤模型 | 小鼠/大鼠灌胃50%乙醇，12-14ml/kg BW（6000-7000mg/kg BW） | 1. 受试组灌胃样品30天，末次给药后禁食16小时 | -肝匀浆MDA、GSH、TG | -MDA/TG 显著低于模型组，GSH 显著高于模型组（P≤0.05） |
五、关键操作步骤
u造模注意事项：
CCl₄需新鲜配制，避免光照；酒精模型需确保动物空腹灌胃，减少胃潴留影响。
造模后观察动物状态，筛选ALT/AST显著升高（CCl₄模型）或肝组织TG升高（酒精模型）的合格模型动物。
u 样本采集：
CCl₄模型：造模后24-48小时处死动物，取血清测ALT/AST，肝左叶固定做病理。
酒精模型：灌胃乙醇后禁食16小时处死，取肝组织制备匀浆测MDA、GSH、TG，冰冻切片染色观察脂肪变性。
六、数据采集与分析
u统计方法：
计量资料（体重、墨汁推进率等）：方差齐性检验后用单因素方差分析（ANOVA），组间比较用Dunnett’s检验。
计数资料：χ²检验或秩和检验。
u结果判定：
满足任一条件，可判定受试样品具有对酒精性肝损伤有辅助保护作用。
1.肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标结果阳性。
2.肝脏MDA、还原型GSH和TG三项指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性。
