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辅助润肠通便
参考《保健食品功能检验与评价方法(2023 年版)》
一、实验目的
验证受试样品对哺乳动物肠道蠕动功能的改善作用,通过便秘模型观察小肠运动、排便时间及粪便指标变化。
二、实验动物选择
品种:成年雄性小鼠,体重18-22g,每组10-15只。
环境:屏障系统饲养,温度(20-25℃),湿度(50%-60%),12小时昼夜节律。
三、实验分组与剂量设计
组别 | 剂量设计 | 样本量 | 处理周期 |
低剂量组 | 人体推荐量10倍+造模药物 | 10-15只 | 7-15天 |
中剂量组 | 人体推荐量20倍+造模药物 | 10-15只 | 7-15天 |
高剂量组 | 人体推荐量30倍+造模药物 | 10-15只 | 7-15天 |
模型对照组 | 造模药物+溶剂灌胃 | 10-15只 | 7-15天 |
阴性对照组 | 溶剂灌胃 | 10-15只 | 7-15天 |
四、核心检测指标与方法
检测维度 | 实验项目 | 操作要点 | 判定标准 |
小肠运动功能 | 墨汁推进率 | 1. 造模后灌胃墨汁(含5%活性炭+10% 阿拉伯树胶); | 受试组推进率显著高于模型对照组(P≤0.05)。 |
排便功能 | 首粒排黑便时间 | 1. 灌胃墨汁后记录首粒黑便排出时间; | 受试组时间显著短于模型对照组(P≤0.05)。 |
5-6小时排便粒数/重量 | 1. 收集5-6小时内粪便,计数粒数并称重; | 受试组粒数/重量显著高于模型对照组(P≤0.05)。 | |
粪便性状 | 感官评分 | 按布里斯托分类法评估粪便硬度(I级为正常软便,III级为硬结便)。 | 受试组粪便性状改善至I-II级比例显著高于模型对照组。 |
五、关键操作步骤
u模型建立:
造模药物:复方地芬诺酯(5mg/kg BW)或洛哌丁胺(2-4mg/kg BW),灌胃0.5小时后建立便秘模型。
禁食处理:实验前禁食不禁水16小时,确保肠道排空。
u墨汁推进实验:
墨汁配制:阿拉伯树胶100g +活性炭50g,加水定容至1000mL,煮沸三次后4℃保存。
测量要求:小肠拉成直线,避免拉伸变形,精确测量幽门至墨汁前沿距离。
u排便指标监测:
单笼饲养:灌墨汁后单笼观察,记录首粒黑便时间及后续5-6小时内排便情况。
避免污染:及时清除非黑便粪便,确保数据准确性。
六、数据采集与分析
u统计方法:
计量资料(体重、墨汁推进率等):方差齐性检验后用单因素方差分析(ANOVA),组间比较用Dunnett’s检验。
计数资料:χ²检验或秩和检验。
u结果判定:
受试组墨汁推进率显著升高,且首粒排便时间缩短、粪便粒数/重量增加,任意两项指标阳性(P≤0.05)。
粪便性状改善与上述指标结合判定。
