业务咨询
有助于改善骨密度
参考《保健食品功能检验与评价方法（2023 年版）》
一、实验目的
验证受试样品对哺乳动物骨密度的改善作用，通过动物模型观察骨钙含量、骨密度等指标变化。
二、实验动物选择
方案一（补钙为主）：出生4周左右断乳大鼠（雄性），体重60-75g，每组8-12只。
方案二（非补钙为主）：成年雌性SD/Wistar大鼠，体重300g左右，每组8-12只，雌雄分笼饲养。
三、实验分组与剂量设计
组别 | 方案一（补钙组） | 方案二（非补钙组） |
空白对照组 | 低钙饲料（钙含量150mg/100g饲料）+ 溶剂灌胃 | 正常饲料+溶剂灌胃 |
模型对照组 | 低钙饲料（方案一）或卵巢切除模型（方案二） | 低钙饲料+卵巢切除+溶剂灌胃 |
低剂量组 | 低钙饲料+受试样品（人体推荐量 5 倍） | 低钙饲料+卵巢切除+受试样品（人体推荐量5 倍） |
中剂量组 | 低钙饲料+受试样品（中等剂量） | 低钙饲料+卵巢切除+受试样品（中等剂量） |
高剂量组 | 低钙饲料+受试样品（较高剂量） | 低钙饲料+卵巢切除+受试样品（较高剂量） |
阳性对照组 | 低钙饲料+碳酸钙（与高剂量组钙水平一致） | 卵巢切除+阳性药物（如雌激素） |
四、实验饲料制备
u方案一（补钙为主）：
低钙饲料：基础饲料含钙150mg/100g，需满足除钙外的营养标准（如蛋白质、磷等）。
受试样品饲料：在低钙饲料中加入受试样品，按剂量梯度调整。
u方案二（非补钙为主）：
正常饲料：符合国家标准的维持饲料。
模型饲料：低钙饲料或正常饲料+卵巢切除造模。
五、核心指标与检测方法
检测维度 | 实验项目 | 操作要点 | 判定标准 |
骨代谢指标 | 骨钙含量（原子吸收法） | 1. 实验结束后处死动物，取股骨消化处理； | 方案一：受试组骨钙含量显著高于低钙对照组，且≥碳酸钙对照组； |
骨密度（双能X线法） | 1. 对股骨中点及远心端进行扫描； | 方案一：受试组骨密度显著高于低钙对照组，且≥碳酸钙对照组； | |
血清碱性磷酸酶（ALP） | 1. 采血后离心分离血清； | 方案一：受试组ALP水平较对照组趋于正常； | |
安全性指标 | 肝肾功能（ALT、AST、BUN） | 血液生化检测，评估受试样品对肝肾功能的影响。 | 无显著异常（P＞0.05）。 |
六、关键操作步骤
u方案一：补钙为主的受试物：
造模与处理：
断乳大鼠适应维持饲料5-7天，随机分组后给予低钙饲料+受试样品，连续灌胃/喂养3个月，每周记录体重及摄食量。
u方案二（非补钙为主）：
卵巢切除造模：成年雌性大鼠行无菌卵巢切除术，术后适应1周，筛选骨密度低于正常组的个体进入实验。
给药操作：假手术组（正常饲料+溶剂）与模型组（卵巢切除+低钙饲料+溶剂）及各剂量组连续灌胃3个月，定期观察活动状态。
七、数据处理与结果判定
u统计方法：
计量资料（如OD值、重量差）：先进行方差齐性检验，若满足条件用单因素方差分析（ANOVA），组间比较用Dunnett’s检验；否则用秩和检验。
计数资料（如吞噬率）：用χ²检验或Fisher确切概率法。
u结果判定：
方案一：骨钙含量或骨密度显著高于低钙对照组，且钙吸收率≥碳酸钙对照组，判定为阳性。
方案二：骨钙含量或骨密度显著高于模型对照组，且肝肾功能无异常，判定为阳性。
