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改善脾阳虚
参考《保健食品功能检验与评价方法（2023 年版）》
一、实验目的
建立哺乳动物（大鼠/小鼠）脾阳虚模型，验证受试样品对脾阳虚证的改善作用，通过生理指标、病理检测及证候表现评估功效。
二、实验动物选择
1. 模型动物：
大鼠：SD或Wistar大鼠，6-8周龄，体重180-220g，雄性（脾阳虚模型多选用雄性），每组8-12只。
小鼠：ICR或C57BL/6小鼠，6-8周龄，体重20-22g，雄性，每组10-15只。
三、模型构建方法
模型类型 | 操作要点 | 模型特征验证 |
苦寒泻下法 | 大鼠/小鼠灌胃番泻叶水煎液（10g/kg）或生大黄煎剂（5g/kg），每日1次，连续10-14天。 | 出现便溏、体重下降、畏寒、活动减少、舌淡苔白等症状。 |
饮食失节+劳倦法 | 大鼠/小鼠禁食24小时后，给予冷开水自由饮用，同时每日游泳疲劳刺激（水温 18±2℃，至力竭），连续14天。 | 便溏、蜷缩少动、毛发稀疏、体温降低（肛温＜36.5℃）。 |
药物诱导法 | 大鼠腹腔注射氢化可的松（25mg/kg），每日1次，连续7天；或灌胃甲状腺素（5mg/kg）+ 利血平（0.5mg/kg）联合造模。 | 便溏、血清 D-木糖吸收降低、胃肠动力减弱。 |
四、实验分组与剂量设计
组别 | 动物类型 | 处理方式 | 样本量 | 处理周期 |
空白对照组 | 大鼠/小鼠 | 正常饲料+生理盐水灌胃 | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 14-21天 |
模型对照组 | 大鼠/小鼠 | 造模+生理盐水灌胃 | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 14-21天 |
低剂量组 | 大鼠/小鼠 | 造模+受试样品（人体推荐量5倍/10 倍） | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 14-21天 |
中剂量组 | 大鼠/小鼠 | 造模+受试样品（人体推荐量10倍/20 倍） | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 14-21天 |
阳性对照组 | 大鼠/小鼠 | 造模+阳性药物（如四君子汤） | 8-12只（大鼠）/10-15只（小鼠） | 14-21天 |
五、核心检测指标与方法
检测维度 | 实验项目 | 操作要点 | 判定标准 |
证候表现 | 外观体征观察 | 记录便溏程度（稀便率）、活动量、毛色、体温（肛温）、摄食量。 | 便溏率降低，活动量、摄食量增加，体温回升。 |
生理功能 | 胃肠动力检测 | 炭末推进实验：灌胃炭末混悬液，计算小肠推进率。 | 小肠推进率显著升高（P≤0.05）。 |
血清D-木糖含量 | 灌胃D-木糖溶液（1g/kg），2小时后采血，比色法检测。 | D-木糖含量显著升高（P≤0.05）。 | |
病理指标 | 脾组织形态学（HE染色） | 取脾脏组织固定、切片，观察脾 |
六、数据采集与分析
u统计方法：
计量资料：先进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析（ANOVA），组间比较用Dunnett’s检验；若数据非正态或方差不齐，进行对数转换或采用秩和检验（如 Kruskal-Wallis 检验）。
计数资料（如有效率）：采用χ²检验，若总例数< 40 或理论数≤1，改用Fisher确切概率法。
