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有助于抗氧化
参考《保健食品功能检验与评价方法（2023 年版）》
一、实验目的
验证受试样品对哺乳动物（大鼠/小鼠）抗氧化能力的调节作用，评估其是否具有抗氧化功效。
二、实验动物选择
u模型动物：
老龄动物：10月龄以上大鼠或8月龄以上小鼠，单一性别，每组大鼠8-12只、小鼠10-15 只。
氧化损伤模型：D-半乳糖诱导的氧化损伤小鼠（25-30g，连续注射40mg-1.2g/kg BWD-半乳糖6周）或乙醇诱导的氧化损伤大鼠（180-220g，灌胃50%乙醇12mL/kg BW）。
u对照组：
溶剂对照组：给予等体积生理盐水或溶剂。
空白对照组：仅含正常动物（必要时设置）。
三、实验分组与剂量设计
组别 | 动物类型 | 剂量 | 样本量 | 处理周期 |
低剂量组 | 老龄/模型动物 | 人体推荐量10倍（小鼠）/5倍（大鼠） | 8-15只 | 30-45天 |
中剂量组 | 老龄/模型动物 | 人体推荐量20倍（小鼠）/10倍（大鼠） | 8-15只 | 30-45天 |
高剂量组 | 老龄/模型动物 | 人体推荐量30倍（不超过上限） | 8-15只 | 30-45天 |
溶剂对照组 | 老龄/模型动物 | 生理盐水/溶剂 | 8-15只 | 30-45天 |
空白对照组 | 正常动物 | 无处理 | 8-15只 | 同期观察 |
注：D-半乳糖/乙醇造模期间同步给予受试样品，模型对照组继续造模但不给予受试样品。
四、核心检测指标与方法
检测维度 | 实验项目 | 操作要点 | 判定标准 |
脂质氧化 | 丙二醛（MDA）含量测定 | 1. 取血清/组织匀浆，用荧光法（536nm 激发，550nm发射）或比色法（532nm）测定； | 实验组MDA含量显著低于对照组（P≤0.05）。 |
8-表氢氧-异前列腺素测定 | 1. 酶联免疫法（ELISA试剂盒）检测血清中8-Isoprostane 浓度； | 含量显著降低（P≤0.05）。 | |
蛋白质氧化 | 蛋白质羰基含量测定 | 1. 血清/组织匀浆与DNPH反应生成腙，测370nm吸光度； | 羰基含量显著低于对照组（P≤0.05）。 |
抗氧化酶活性 | 超氧化物歧化酶（SOD）活力 | 1. 黄嘌呤氧化酶法测定，530nm处测亚硝酸盐生成量； | 酶活性显著高于对照组（P≤0.05）。 |
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px） | 1. 测定GSH氧化速率，423nm处测DTNB 显色强度； | 酶活性显著高于对照组（P≤0.05）。 | |
抗氧化物质 | 还原型谷胱甘肽（GSH）含量 | 1. 磺基水杨酸沉淀蛋白后，420nm处测 DTNB显色强度； | GSH含量显著高于对照组（P≤0.05）。 |
五、数据处理与结果判定
u统计方法：
计量资料（如OD值、重量差）：先进行方差齐性检验，若满足条件用单因素方差分析（ANOVA），组间比较用Dunnett’s检验；否则用秩和检验。
计数资料（如吞噬率）：用χ²检验或 Fisher确切概率法。
u结果判定：
四项指标（MDA、蛋白质羰基、SOD/GSH-Px、GSH）中至少三项阳性，且抗氧化酶活性与抗氧化物质指标至少一项阳性，可判定受试样品具有抗氧化作用。
