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有助于增强免疫力
参考《保健食品功能检验与评价方法(2023 年版)》
一、实验目的
验证受试样品对哺乳动物(小鼠)免疫功能的调节作用,评估其增强免疫力的功效。
二、实验动物选择
模型动物:近交系小鼠(如BALB/c),18-22g,单一性别,每组10-15只。
对照组:正常小鼠(给予生理盐水)。
三、实验分组与剂量设计
组别 | 动物类型 | 剂量 | 样本量 | 处理周期 |
低剂量组 | 小鼠 | 人体推荐量10倍 | 10-15只 | 30天 |
中剂量组 | 小鼠 | 人体推荐量20倍 | 10-15只 | 30天 |
高剂量组 | 小鼠 | 人体推荐量30倍 | 10-15只 | 30天 |
阴性对照组 | 小鼠 | 生理盐水 | 10-15只 | 30天 |
阳性对照组 | 小鼠 | 已知免疫增强剂 | 10-15只 | 30天 |
注:阳性对照组可选左旋咪唑等,根据需求设置。
四、核心检测指标与方法
检测维度 | 实验项目 | 操作要点 | 判定标准 |
细胞免疫 | ConA诱导脾淋巴细胞转化(MTT 法) | 1. 制备脾细胞悬液(活细胞率>95%); | 实验组OD差值显著高于对照组(P≤0.05)。 |
迟发型变态反应(耳肿胀法) | 1. DNFB致敏后耳部攻击; | 耳重差显著高于对照组(P≤0.05)。 | |
体液免疫 | 抗体生成细胞检测(空斑法) | 1. 脾细胞与SRBC混合孵育; | 空斑数/10⁵脾细胞显著增加(P≤0.05)。 |
血清溶血素测定(HC₅₀法) | 1. 血清与SRBC、补体反应; | HC₅₀值显著高于对照组(P≤0.05)。 | |
巨噬细胞功能 | 碳廓清实验 | 1. 尾静脉注射印度墨汁; | 吞噬指数α显著升高(P≤0.05)。 |
腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞 | 1. 腹腔注射鸡红细胞; | 吞噬率/指数显著高于对照组(P≤0.05)。 | |
NK细胞活性 | LDH法 | 1. 脾细胞与靶细胞(YAC-1)共孵育; | NK活性显著增强(P≤0.05)。 |
五、数据处理与结果判定
u统计方法:
计量资料(如OD值、重量差):先进行方差齐性检验,若满足条件用单因素方差分析(ANOVA),组间比较用Dunnett’s 检验;否则用秩和检验。
计数资料(如吞噬率):用χ²检验或 Fisher确切概率法。
u结果判定:
任意2个维度检测结果阳性,或单一维度内2个实验/2个剂量组阳性,即可判定受试样品具有增强免疫力作用。
