有助于增强免疫力

参考《保健食品功能检验与评价方法(2023 年版)》

增强免疫力.pdf 

一、实验目的

验证受试样品对哺乳动物(小鼠)免疫功能的调节作用,评估其增强免疫力的功效。

二、实验动物选择

模型动物:近交系小鼠(如BALB/c),18-22g,单一性别,每组10-15只。

对照组:正常小鼠(给予生理盐水)。

三、实验分组与剂量设计

组别

动物类型

剂量

样本量

处理周期

低剂量组

小鼠

人体推荐量10

10-15

30

中剂量组

小鼠

人体推荐量20

10-15

30

高剂量组

小鼠

人体推荐量30

10-15

30

阴性对照组

小鼠

生理盐水

10-15

30

阳性对照组

小鼠

已知免疫增强剂

10-15

30

注:阳性对照组可选左旋咪唑等,根据需求设置。

四、核心检测指标与方法

检测维度

实验项目

操作要点

判定标准

细胞免疫

ConA诱导脾淋巴细胞转化(MTT 法)

1. 制备脾细胞悬液(活细胞率>95%);
2. ConA孵育72h,测570nm OD值。

实验组OD差值显著高于对照组(P≤0.05)。

迟发型变态反应(耳肿胀法)

1. DNFB致敏后耳部攻击;
2. 测量耳片重量差。

耳重差显著高于对照组(P≤0.05)。

体液免疫

抗体生成细胞检测(空斑法)

1. 脾细胞与SRBC混合孵育;
2. 计数溶血空斑数。

空斑数/10⁵脾细胞显著增加(P≤0.05)。

血清溶血素测定(HC₅₀法)

1. 血清与SRBC、补体反应;
2. 540nm吸光度计算 HC₅₀

HC₅₀值显著高于对照组(P≤0.05)。

巨噬细胞功能

碳廓清实验

1. 尾静脉注射印度墨汁;
2. 2min/10minOD 值,计算吞噬指数 α

吞噬指数α显著升高(P≤0.05)。

腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞

1. 腹腔注射鸡红细胞;
2. 镜检计数吞噬率和吞噬指数。

吞噬率/指数显著高于对照组(P≤0.05)。

NK细胞活性

LDH

1. 脾细胞与靶细胞(YAC-1)共孵育;
2. 490nm OD值计算细胞活性。

NK活性显著增强(P≤0.05)。

五、数据处理与结果判定

u统计方法:

计量资料(如OD值、重量差):先进行方差齐性检验,若满足条件用单因素方差分析(ANOVA),组间比较用Dunnetts 检验;否则用秩和检验。

计数资料(如吞噬率):用χ²检验或 Fisher确切概率法。

u结果判定:

任意2个维度检测结果阳性,或单一维度内2个实验/2个剂量组阳性,即可判定受试样品具有增强免疫力作用。


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