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有助于控制体内脂肪
参考《保健食品功能检验与评价方法(2023 年版)》
一、实验目的
通过动物实验验证受试样品对哺乳动物体内脂肪含量的控制作用,观察体重、脂肪沉积等指标变化。
二、实验动物选择
品种:雄性大鼠。
体重:适应期结束时体重 200±20g。
数量:每组 8-12 只,总样本量根据分组确定。
三、实验分组与剂量设计
组别 | 数量 | 处理方式 | 剂量说明 |
空白对照组 | 10只 | 维持饲料,灌胃给予等量溶剂 | 正常饮食对照 |
模型对照组 | 10只 | 高热量模型饲料,灌胃给予等量溶剂 | 肥胖模型对照 |
低剂量组 | 10只 | 高热量模型饲料+受试样品(人体推荐量5倍) | 根据预实验调整剂量梯度 |
中剂量组 | 10只 | 高热量模型饲料+受试样品(中等剂量) | 梯度间隔建议1.5-2倍低剂量 |
高剂量组 | 10只 | 高热量模型饲料+受试样品(较高剂量) | 梯度间隔建议1.5-2倍中剂量 |
阳性对照组 | 可选 | 高热量模型饲料+已知有效药物(如奥利司他) | 用于验证模型有效性 |
四、饲料准备
u维持饲料:
符合国家标准,营养均衡。
u高热量模型饲料:
成分:维持饲料基础上添加 15% 蔗糖、15% 猪油,辅以酪蛋白、磷酸氢钙等。
要求:除粗脂肪外,其他营养指标(水分、粗蛋白等)需达到维持饲料国家标准。
五、实验流程
u适应期(5-7天)
所有大鼠喂饲维持饲料,在屏障系统下观察健康状况,每周记录体重。
u造模与筛选期(2周)
分组:随机选取10只大鼠作为空白对照组(维持饲料),其余大鼠给予高热量模型饲料。
操作:每周记录摄食量、剩食量,称量体重;2周后按体重增重排序,淘汰后1/3肥胖抵抗大鼠,保留前2/3肥胖敏感大鼠(约40只)进入下一阶段。
u受试样品给予期(6-10周)
分组:将肥胖敏感大鼠随机分为模型对照组、空白对照组及各剂量组。
处理:
空白对照组:维持饲料 + 溶剂灌胃。
模型对照组与剂量组:高热量模型饲料,剂量组每日灌胃对应剂量受试样品,对照组灌胃等量溶剂。
记录:每周监测体重、摄食量,计算食物利用率及摄入总热量。
u解剖与指标检测
麻醉:实验结束后,以1%戊巴比妥钠(0.5mL/100g BW)麻醉大鼠。
取样:解剖取肾周围脂肪、睾丸周围脂肪,称重并计算脂/体比(脂肪重量/体重)。
六、观察指标
类别 | 具体指标 | 检测方法 |
基础指标 | 体重、体重增重、摄食量、摄入总热量 | 每周称量、记录 |
脂肪指标 | 肾周脂肪重量、睾丸周围脂肪重量、脂 / 体比 | 解剖后称重计算 |
安全性 | 一般健康状况(活动、饮食等) | 日常观察 |
七、数据采集与分析
u测量方法:
采用尾脉搏法(无创性小动物血压测定仪),套袖充气速度20-30mmHg/s,记录连续3 次读数(心率变化≤10次/分、血压变化≤6mmHg),取平均值。
u统计方法:
先进行方差齐性检验,若方差齐,采用单因素方差分析(ANOVA),组间比较用Dunnett’s 检验(与阴性对照组比较);若数据非正态或方差不齐,经变量转换后再分析,仍不满足则用秩和检验(如Kruskal-Wallis 检验)。
u结果判定:
剂量组体重、体重增重、脂/体比显著低于模型对照组(P<0.05),且摄食量无显著差异,可判定受试样品有效。
