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有助于维持血压健康水平
参考《保健食品功能检验与评价方法(2023 年版)》
一、实验目的
通过动物实验,验证受试样品对哺乳动物(大鼠)血压的调节作用,评估其是否具有维持血压健康水平的功效。
二、实验动物选择
1. 模型动物:
自发高血压大鼠(SHR):首选10-12周龄,体重180-220克,雌雄兼用,每组8-12只。
肾血管型高血压大鼠:次选,通过手术制备 “两肾一夹” 模型(银夹内径0.20-0.25mm),术后30天筛选血压≥21.3kPa(160mmHg)且稳定的个体。
2. 正常对照动物:健康Wistar或SD大鼠,年龄、体重与模型组匹配。
三、实验分组与剂量设计
组别 | 动物类型 | 受试样品剂量 | 样本量 | 对照处理 |
低剂量组 | SHR 或肾血管型大鼠 | 人体推荐量的 5 倍 | 8-12 只 | 等体积溶剂灌胃 |
中剂量组 | SHR 或肾血管型大鼠 | 人体推荐量的 10 倍 | 8-12 只 | 等体积溶剂灌胃 |
高剂量组 | SHR 或肾血管型大鼠 | 人体推荐量的 15 倍 | 8-12 只 | 等体积溶剂灌胃 |
阴性对照组 | SHR 或肾血管型大鼠 | 溶剂(如生理盐水) | 8-12 只 | 等体积溶剂灌胃 |
正常高剂量组 | 正常 Wistar/SD 大鼠 | 受试样品高剂量 | 8-12 只 | 等体积溶剂灌胃 |
阳性对照组 | SHR 或肾血管型大鼠 | 已知降压药物(如卡托普利) | 8-12 只 | 按临床等效剂量给药 |
注:必要时设置阳性对照组(如验证药物类受试样品),给药周期30天,可延长至45天。
四、关键操作步骤
u模型制备(仅肾血管型高血压大鼠):
手术夹持左肾动脉,术后30天测量血压,筛选符合标准(血压≥160mmHg 或较术前升高 4kPa)的大鼠。
u适应期:
实验前1周对所有动物进行多次血压测量,使其适应测压环境(室温保持25℃,鼠尾套袖固定于根部,恒温盒保温)。
u给药与监测:
每日定时灌胃受试样品或对照物,每周测量1-2次血压和心率(需在动物清醒、安静状态下测定,避免应激反应)。
停止给药后,继续观察7-14天或至血压恢复至对照组水平。
五、数据采集与分析
u测量方法:
采用尾脉搏法(无创性小动物血压测定仪),套袖充气速度20-30mmHg/s,记录连续3 次读数(心率变化≤10次/分、血压变化≤6mmHg),取平均值。
u统计方法:
先进行方差齐性检验,若方差齐,采用单因素方差分析(ANOVA),组间比较用Dunnett’s 检验(与阴性对照组比较);若数据非正态或方差不齐,经变量转换后再分析,仍不满足则用秩和检验(如Kruskal-Wallis 检验)。
u结果判定:
实验组血压显著低于阴性对照组(P≤0.05),且对心率无显著影响,同时正常高剂量组血压无异常变化,可判定受试样品有效。
