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缓解体力疲劳
参考《保健食品功能检验与评价方法（2023 年版）》
一、实验目的
验证受试样品对哺乳动物（小鼠 / 大鼠）体力疲劳的缓解作用，通过运动耐力与生化指标评估其抗疲劳功效。
二、实验动物选择
小鼠：纯系成年小鼠，体重18-22g，雄性优先，每组10-15只。
大鼠：Wistar或SD大鼠，体重160-200g，雄性优先，每组8-12只。
三、实验分组与剂量设计
组别 | 动物类型 | 剂量 | 样本量 | 处理周期 |
低剂量组 | 小鼠/大鼠 | 人体推荐10倍（小鼠）/5倍（大鼠） | 10-15只（小鼠）/8-12只（大鼠） | 30-45天 |
中剂量组 | 小鼠/大鼠 | 人体推荐量20倍（小鼠）/10倍（大鼠） | 10-15只（小鼠）/8-12只（大鼠） | 30-45天 |
高剂量组 | 小鼠/大鼠 | 人体推荐量30倍 | 10-15只（小鼠）/8-12只（大鼠） | 30-45天 |
阴性对照组 | 小鼠/大鼠 | 生理盐水/溶剂 | 10-15只（小鼠）/8-12只（大鼠） | 30-45天 |
阳性对照组 | 小鼠/大鼠 | 已知抗疲劳药物（如肌酸） | 10-15只（小鼠）/8-12只（大鼠） | 30-45天 |
四、核心检测指标与方法
检测维度 | 实验项目 | 操作要点 | 判定标准 |
运动耐力 | 负重游泳实验 | 1. 末次给药30min后，小鼠尾部负荷5%体重铅皮，放入水深≥30cm、水温25℃±1℃的游泳箱； | 实验组游泳时间显著长于对照组（P≤0.05）。 |
生化指标 | 血清尿素测定 | 1. 小鼠负重游泳90min（大鼠同）后休息60min采血； | 实验组血清尿素水平显著低于对照组（P≤0.05）。 |
肝糖原测定（蒽酮法） | 1. 末次给药30min后处死动物，取肝脏制备匀浆； | 实验组肝糖原含量显著高于对照组（P≤0.05）。 | |
血乳酸测定 | 1. 游泳前、游泳后0min、休息20min分别采血； | 实验组曲线下面积显著小于对照组（P≤0.05）。 |
五、关键操作步骤
u负重游泳实验：
铅皮缠绕牢固，避免脱落；游泳箱每次测试不超过5只动物，避免拥挤影响结果。
水温严格控制在25℃±1℃，用玻璃棒驱赶保持四肢运动，避免漂浮不动。
u血清尿素测定：
采血后尽快离心分离血清，避免溶血；二乙酰一肟法需沸水浴准确10分钟，冷却后30 分钟内完成比色。
u肝糖原测定：
肝组织匀浆需充分，离心后取上清液；蒽酮试剂需临用前配制，避免光照影响显色。
u血乳酸测定：
游泳后立即采血，避免乳酸代谢影响结果；乳酸仪法需校准仪器，自配试剂法需控制沸水浴时间与显色温度。
六、数据处理与结果判定
u统计方法：
计量资料（如OD值、重量差）：先进行方差齐性检验，若满足条件用单因素方差分析（ANOVA），组间比较用Dunnett’s检验；否则用秩和检验。
计数资料（如吞噬率）：用χ²检验或 Fisher确切概率法。
u结果判定：
负重游泳实验阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原三项指标中至少两项阳性，可判定受试样品具有缓解体力疲劳作用。
